< 07-2018 >
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Catalogues


IMMUNOHISTOCHIMIE: PROBLEMES ?


MON IMMUNOHISTOCHIMIE NE MARCHE PAS :

POURQUOI ?

QUELLE STANDARDISATION POSSIBLE ?

 

FIXATION DES PIECES :

  • Formol à 4% tamponné
    • Petites pièces minimum 6 heures, maximum 12 heures
    •  Grosses pièces : de 24 à 72 heures. Nous avons choisi 48 h

MON MATÉRIEL A-T-IL ÉTÉ CONTRÔLE ?

  • Pipettes, dates du dernier contrôle ?
  • Etuve à 37 ?
  • Frigo à 3 ou 4° ?
  • Congélateur à moins 18 ?
  • Plaques chauffantes : 56 ?
  • Vérifier le pH de l’eau de ville et déminéralisée. Il doit être entre 7 et 7,5

COUPE :

  • Couper si possible à 3 microns 

ÉTALEMENT :

  •  RAS
  •  Platine à 56°
  • Une heure maximum sur plaque,
  • Etuve à 37° une nuit mini, mieux si deux nuits
  • SI STOCKAGE :
    • Au frigo à 4° si besoin dans boites hermétiques pour éviter la condensation. Mettre en haut et en avant du frigo
    •  Dans un placard à l’abri de la lumière si frigo impossible

LE MATIN DE LA TECHNIQUE :

  •  Allumer le bain-marie (98°)
  •  Mettre le tampon Ph9 et Ph6 (RE et EGFR)
  •  Sortir lames du frigo ou placard,
  •  Poser les lames ½ heure sur plaques chauffantes à 56°
  •  Déparaffinage machine à température ambiante. Ne pas mettre sur « chauffage »
  • Terminer dans un bain d’eau distiller.
  • Démasquage. NB : ne pas lancer le cycle d’immuno en même temps que les frottis (mêmes alcools)

DÉMASQUAGE :

  • Lames dans le bac avec solution préalablement chauffée à 98°, bain marie en marche, cela pendant 40 minutes
  • Ne pas mettre certains anticorps, le marquage est trop intense : PS 100, KAPPA, Lambda On peut mettre ces anticorps à condition de diluer beaucoup : par exemple au 1/1000 éme voir plus : la PS100 est chez-nous au 1/3000 ème
  • Pour presque tous les anticorps, pH9, car il normalise l’antigénicité des pièces quelque soit le mode de préparation.

LE BAIN MARIE :

  •  Il est à 98° lames dedans pendant 40 minutes.
  •  Sortir les lames et les laisser refroidir pas plus de 20 minutes.
  • Transfert des lames dans de l’eau distillée 5 minutes
  • Charger les lames sur l’automate. Et lancer la technique

AUTOMATE :

  • Prendre les zones 1 et 2 (2 zones)
  • Deux incubations AEC
  •  DAB incubation de 10 minutes
  • Bidons à laver avec un fond de javel, dilution à 1% et rincer
  •  QUE FAIRE DE LA DAB ?
  • MONTAGE DES LAMES :
  •  En AEC montage aqueux, « Faramount » PNL2 ou IF
  • En DAB montage alcool, toluène et Eukitt

ENTRETIEN APPAREIL :

  • Nettoyer le ou les bidons un fois par mois avec de la javel, bien rincer à l’eau courante et déminéralisée.
  • Rincer les tuyaux avec le produit cleanyst dilué, amorçage et rincer à l’eau abondamment.

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